Dopo aver utilizzato il perossido di idrogeno (in particolare il perossido di idrogeno vaporizzato VHP) per la disinfezione e la sterilizzazione nelle cabine di biosicurezza, un monitoraggio rigoroso e scientifico e la verifica dei risultati sono l'unico modo per confermare l'efficacia della sterilizzazione, nonché i requisiti fondamentali per il controllo di qualità e la conformità normativa. Non si tratta semplicemente di un processo di "esecuzione del dispositivo", ma di un processo a ciclo chiuso-che richiede molteplici prove fisiche, chimiche e biologiche.
Quella che segue è un'analisi sistematica delle tecniche di monitoraggio e validazione.
Principio fondamentale: sistema di tripla verifica
Una convalida completa dovrebbe includere il "monitoraggio dei parametri di processo", gli "indicatori chimici" e il "test di sfida sugli indicatori biologici", che si completano a vicenda e sono indispensabili.
Monitoraggio dei parametri di processo (monitoraggio-in tempo reale per garantire che le condizioni soddisfino gli standard)
Questa è la prima linea di difesa per la verifica, che prevede la registrazione in tempo reale- dei principali parametri fisici e chimici tramite i sensori del dispositivo, dimostrando che il ciclo di sterilizzazione funziona entro l'intervallo di parametri impostato ed effettivo.
Parametri di monitoraggio:
Concentrazione di vapori di perossido di idrogeno (ppm): il parametro più critico. Deve essere raggiunta e mantenuta alla concentrazione target predeterminata (ad esempio centinaia di ppm) per un periodo di tempo sufficiente. Una bassa concentrazione può portare al fallimento della sterilizzazione.
Umidità relativa (% RH): controllata a un livello basso (normalmente<40%) to ensure that VHP is in an efficient "micro condensation" state rather than large droplet condensation. Excessive humidity can dilute disinfectants and may damage equipment.
Temperatura: monitorare la temperatura della camera, che influisce sulla pressione del vapore saturo e sul processo di condensazione.
Pressione/flusso d'aria: assicurarsi che la camera sia sigillata e che la circolazione del gas sia normale.
Tempo di esposizione: la durata mantenuta alla concentrazione target.
Come eseguire:
Completato automaticamente dai sensori e dal sistema di controllo integrati nel generatore VHP.
Requisito chiave: l'apparecchiatura dovrebbe essere in grado di generare e archiviare grafici di dati ciclici completi (curva di concentrazione-tempo, curva di temperatura e umidità), che dovrebbero essere inclusi come parte del rapporto di convalida. Qualsiasi deviazione del parametro dall'intervallo preimpostato dovrebbe comportare un allarme o la terminazione del loop.
Indicatori chimici (risultati visivi qualitativi/semiquantitativi-in tempo reale)
Utilizzato per determinare in modo rapido e intuitivo se un articolo è esposto a un ambiente di sterilizzazione con perossido di idrogeno e può riflettere indirettamente se il dosaggio è sufficiente.
Tipo e principio:
Scheda con indicatore chimico del tipo di etichetta: Contiene coloranti sensibili al perossido di idrogeno. Quando viene accumulata una quantità sufficiente di dose di perossido di idrogeno (concentrazione x tempo), si verificano cambiamenti irreversibili da un colore all'altro.
Posizione di posizionamento: deve essere collocato nel luogo di sterilizzazione più difficile da raggiungere, come ad esempio:
L'angolo più profondo dell'area di lavoro dell'armadio sicuro.
All'interno del canale di drenaggio.
Il giunto tra il filtro e il telaio di installazione (se fattibile).
Tubo di scarico interno (se coperto da disinfezione).
Funzione e limitazioni:
Funzione: Fornire risultati immediati per un rilascio rapido; Confermare che il vapore sia stato distribuito nel luogo designato; Come identificatore per distinguere tra elementi "elaborati" e "non elaborati".
Limitazioni: può solo dimostrare l'esposizione, non può dimostrare la sterilità. Il cambiamento di colore indica solo che è stata raggiunta la soglia di dose minima, ma non garantisce l'uccisione di tutti i microrganismi.
Test di sfida sugli indicatori biologici (prova quantitativa di efficacia definitiva)
Questo è il gold standard della verifica e delle prove decisive. Utilizzando spore microbiche standardizzate con elevata resistenza nota, è direttamente dimostrato che il processo di sterilizzazione è sufficiente per uccidere i microrganismi più difficili da uccidere.
Selezione degli indicatori biologici:
Ceppo standard: spore di Geobacillus stearothermophilus. Questo è il batterio di prova standard riconosciuto a livello internazionale con la più forte resistenza al perossido di idrogeno.
Forma del supporto: solitamente una striscia di carta macchiata con goccioline di sospensione di spore, un foglio di acciaio inossidabile o installato su un supporto specifico.
Conteggio noto delle spore: ciascun indicatore biologico contiene un numero noto di spore, tipicamente da 10 ^ 5 a 10 ^ 6 CFU (unità formanti colonie).
Strategia di posizionamento (il passaggio più critico):
Ubicazione: deve essere posizionato nel "punto più freddo" dove la sterilizzazione è più impegnativa o dove il gas è più difficile da penetrare. Per le cappe di biosicurezza, le posizioni consigliate includono:
Sotto il banco da lavoro, nell'angolo vicino alla griglia anteriore.
La giunzione tra la parete di fondo e il banco di lavoro.
Sul retro o negli spazi vuoti degli strumenti interni come i portapipette.
Se l'ambito di verifica include l'interno della valvola di scarico o della tubazione.
Quantità: utilizzare almeno 3 indicatori biologici e includere un controllo positivo non trattato.
Processo di test e interpretazione:
Esposizione: eseguire un ciclo completo di sterilizzazione VHP con l'armadio BI.
Riciclo e coltivazione:
Una volta completato il ciclo, rimuovere la BI in condizioni sterili.
Metterlo in una provetta di recupero dedicata contenente il terreno di coltura.
Coltivare in un'incubatrice a 56-60 gradi C per 24-48 ore (tempo specifico secondo le istruzioni).
Coltivare contemporaneamente il controllo positivo (non sterilizzato) e il controllo negativo (terreno di coltura sterile).
Interpretazione del risultato:
Verifica riuscita: tutti i terreni di coltura BI sterilizzati rimangono limpidi (senza scolorimento/torbidità), indicando l'assenza di sopravvivenza delle spore. Il controllo positivo deve mostrare una crescita attiva (ingiallimento/torbidità del terreno di coltura) e il controllo negativo deve rimanere limpido.
Errore di verifica: qualsiasi IB elaborato che mostra crescita (ingiallimento/torbidità) indica un errore del ciclo di sterilizzazione. È necessario indagare a fondo le ragioni (come errori nei parametri, posizionamento, malfunzionamenti delle apparecchiature, problemi di tenuta, ecc.), adattare il piano e condurre nuovamente una verifica completa.
Ciclo e tipologia di verifica
Prima verifica:
Dopo l'installazione dell'apparecchiatura VHP o la sterilizzazione iniziale di un nuovo tipo di cabina di sicurezza, è necessario eseguire questa operazione.
Questa è la verifica più completa, che richiede la determinazione del "punto più freddo" e la definizione dei parametri effettivi del circuito.
Rinnovo regolare:
Di solito condotto ogni sei mesi o annualmente.
Utilizzato per confermare la coerenza di apparecchiature, programmi e operatori.
Monitoraggio quotidiano:
Gli indicatori chimici dovrebbero essere utilizzati per ciascun ciclo di sterilizzazione e le mappe dei parametri di processo dovrebbero essere riviste.
La frequenza dei test sugli indicatori biologici può essere ridotta a seconda dei casi (ad esempio mensile o trimestrale), ma le aree con normative rigorose possono richiedere l'uso di ogni lotto/ciclo.
Documenti e rapporti (prova di conformità)
Tutte le attività di monitoraggio e verifica devono essere documentate formalmente e il rapporto deve includere almeno:
Informazioni sull'attrezzatura: modello e numero del generatore VHP.
Informazioni sul dispositivo target: modello, numero, posizione della cabina di biosicurezza.
Parametri del circuito: imposta la concentrazione target, il tempo, la temperatura e l'umidità, ecc.
Grafico dei dati di processo: curva temporale della concentrazione del funzionamento effettivo, ecc.
Indicatori chimici: tipo, numero di lotto, posizione di posizionamento, risultati del cambiamento di colore (con foto allegate).
Indicatori biologici: ceppo, numero di lotto, quantità di spore, posizione di posizionamento, risultati della coltura (allegati con foto della provetta di coltura).
Conclusione: determinare chiaramente se il ciclo di sterilizzazione è efficace.
Esecutore e Data: Firma dell'operatore e del revisore.
riepilogo
La sterilizzazione non sterilizzata equivale a nessuna sterilizzazione.
Un sistema di validazione affidabile per la disinfezione e la sterilizzazione con perossido di idrogeno delle cappe di biosicurezza è:
Garantire il controllo del processo attraverso la "mappatura dei parametri di processo", ottenere un rapido rilascio visivo attraverso "indicatori chimici" e infine ottenere la certificazione di efficacia finale microbiologica attraverso "test di sfida degli indicatori biologici".
Questo triplo sistema di convalida è la chiave per elevare la disinfezione con perossido di idrogeno da "operazione" a "scienza" tracciabile, riproducibile e affidabile ed è anche la pietra angolare per soddisfare i requisiti di GLP, GMP e accreditamento di laboratori di biosicurezza in patria e all'estero. I responsabili del laboratorio devono implementarla come procedura obbligatoria e monitorarla continuamente.
